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原核细胞型微生物:仅有原始核,无核膜、无核仁,染色体仅为单个裸露DNA分子,无有丝分裂,缺乏完整的细胞器。属于这类微生物的有细菌、放线菌、螺旋体、支原体、衣原体、立克次体。
真核细胞型微生物细胞核分化程度较高,有典型的核结构(有核膜、核仁、多个染色体,由DNA和组蛋白组成),通过有丝分裂进行繁殖。胞浆内有多种完整的细胞器。属于这类微生物的有真菌和原虫。
非细胞型微生物结构最简单,体积最微小,能通过细菌滤器,无细胞结构,由单一核酸(DNA或RNA)和(或)蛋白质外壳组成,无产生能量的酶系统。必须寄生在活的易感细胞内生长繁殖。这类微生物有病毒、亚病毒和肮粒。
微生物是存在于自然界的一大群形体微小、结构简单、肉眼不能直接看到,必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百至数万倍才能看到的微小生物。微生物包括病毒、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、放线菌、真菌和原虫等。
细菌形体微小,通常以微米为测量单位。
条件致病性微生物(正常菌群)——临床上多引起内源性感染。
G+菌特有成分:磷壁酸(重要表面抗原,可用于细菌血清学分型)(外毒素)。
G-菌特有成分:外膜层(由脂多糖(内毒素)、脂质双层(磷脂)、脂蛋白)。
G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥(G-菌无。是溶菌酶、青霉素作用部位)。
细菌的主要遗传物质:核质(染色体)、质粒(存在于胞质,双链闭合环状DNA分子)、转位因子
细菌外毒素的化学本质是蛋白质。不耐热,易被热破坏,56℃20分钟即可破坏,性质不稳定,易被酸和酶破坏,经0.3%到0.4%的甲醛液处理后失去毒性但仍保留免疫原性的生物制品称为类毒素。
内毒素是革兰阴性细菌壁中的脂多糖成分(LPS),由O特异性多糖,非特异性核心多糖和脂质A3。其中脂质A是内毒素的主要毒性组分。
荚膜本身无毒,但能抵抗吞噬细胞的吞噬和消化作用,增强细菌的侵袭力,是病原菌的重要毒力因子。
芽孢是有革兰阳性菌形成的,无致病性,是细菌的休眠体,而非细菌的繁殖方式。特有的吡啶二羧酸成分,具有保护和稳定蛋白质等生命物质的作用。
将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标。
L型革兰阳性菌细胞壁几乎完全缺失,原生质仅被一层胞膜包绕,一般呈球形,称原生质体,菌落:①“油煎蛋”(荷包蛋)样菌落(典型L型细菌)。②颗粒型菌落(简称G型菌落)③丝状菌落(简称F型菌落)。
细菌个体的生长繁殖:细菌一般是以二分裂方式进行无性繁殖,个别细菌如结核分枝杆菌可以通过分枝方式繁殖。
自营菌:以无机物为原料;异营菌(腐生菌:以无生命的有机物质为营养物质;寄生菌:以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。
细菌营养物质:水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。
细菌个体的生长繁殖方式:无性二分裂,在对数期以几何级数增长。
细菌分类(伯杰)等级依次为界、门、纲、目、科、属、种(最小分类单位)。
常用的细菌培养方法是:需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。
通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板,置于空气或含5%~10%CO2的气缸中培养,大部分细菌可于24~48h生长良好。
透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构;扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。
细菌染色的基本程序:涂片(干燥)→固定→初染→染色(媒染)→(脱色)→(复染,使脱色菌体着色)。
SS琼脂有较强的抑菌力,用于志贺菌和沙门菌的分离。因选择性过强,可影响检出率,所以,使用时最好加一种弱选择平板以配对互补。
碱性琼脂或TCBS琼脂用于从粪便中分离霍乱弧菌及其他弧菌。
痰标本:血平板、中国蓝/麦康凯、巧克力平板作分离。
中国蓝/麦康凯用于筛选G-杆菌。
含杆菌肽的巧克力平板(含有V和X因子)用于筛选嗜血杆菌。
连续划线分离法:杂菌不多的标本。
分区划线分离法:杂菌量较多的标本。
斜面接种法:该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。
倾注平板法:牛乳、饮水和尿液细菌计数。
涂布接种法:常用于纸片法药物敏感性测定,也可用于被检标本中的细菌计数。
半固体培养基用于观察细菌的动力(沿穿刺线生长呈模糊或根须状,并使培养基变混浊为动力阳性)
双环:在菌落周围完全溶解的晕圈外有一个部分溶血的第二圆圈。
氧化-发酵试验(O/F试验):有氧参加——氧化型;无氧降解——发酵型;不分解葡萄糖而分解蛋白胨——产碱型。(肠杆菌科细菌发酵型全+)。
甲基红试验(与V-P试验相反):阳性红色,阴性黄色。大肠埃希菌(+),产气肠杆菌(-)。
球菌 葡萄球菌属:G+,触酶阳性、耐热、耐干燥、耐高盐,是抵抗力最强的无芽胞细菌。 表皮葡萄球菌:触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阴性、对新生霉素敏感(医院感染,血培养污染)。 腐生葡萄球菌:触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阴性、对新生霉素耐药(尿路感染)。 金黄色葡萄球菌:触酶试验、凝固酶试验(最简单)、耐热DNA酶试验、甘露醇发酵试验均阳性。对新生霉素敏感。透明溶血环。 致病性:感染(化脓性感染,食物中毒,表现为急性胃肠炎),医院内感染,毒素性疾病。主要致病物质有血浆凝固酶、葡萄球菌溶血素、杀白细胞素、肠毒素、表皮溶解毒素和毒性休克综合征毒素等。 耐药性检测:检耐甲氧西林金葡菌(MRSA),耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRSE),耐万古霉素金葡菌(VRSA),耐万古霉素表皮葡萄球菌(VRSE)。NCCLS/CLSI推荐用头孢西丁纸片法检测mecA基因介导对苯唑西林耐药的葡萄球菌。 链球菌属:链球菌属为触酶阴性,兼性厌氧,呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌,在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长(但肺炎链球菌为混浊生长)。触酶试验阴性,能分解葡萄糖产酸不产气,对其他糖类的分解因不同菌株而异。有些链球菌分解精氨酸产氨、水解七叶苷、马尿酸盐及淀粉等。还有些链球菌可耐受65g/lnac和胆汁。抗力不强,对各种常用消毒剂敏感,60℃加热30分钟即可杀灭。 链球菌属的鉴定:①胆汁七叶苷试验;②Optochin敏感性试验;马尿酸盐水解试验;④CAMP试验;⑤杆菌肽敏感试验。⑤optochin敏感试验。 A群链球菌(猩红热)——杆菌肽敏感; B群链球菌(败血症、肺炎、脑膜炎、咽喉炎)——CAMP试验阳性(与金葡菌,箭头状溶血),水解马尿酸; D群链球菌——七叶苷试验阳性(40%胆汁培养基,变黑); 甲型(α)溶血性链球菌:菌落呈灰色针尖状,菌落周围有1~2mm宽的草绿色溶血环,故又称草绿色链球菌。本菌为条件致病菌。 乙型(β)溶血性链球菌:通称溶血性链球菌,菌落较小,灰白色,菌落周围有2~4mm宽的透明溶血环。该型细菌致病性最强,常引起人和动物多种疾病。 丙型(γ)链球菌:呈灰白色细小菌落,在菌落周围无溶血环。一般无致病性。 人类链球菌感染中85%以上由A群链球菌引起,对青霉素G高度敏感,化脓型链球菌:杆菌肽敏感试验阳性。 肺炎链球菌:混浊生长,有荚膜(荚膜肿胀试验:阳性),大叶性肺炎。分解菊糖、胆汁溶解试验阳性、Optochin敏感试验阳性——与草绿色链球菌鉴别。 肺炎链球菌的鉴定试验:①胆汁溶解试验;②菊糖发酵试验;③动物试验;④英膜肿胀试验;⑤optochin敏感试验。 肠球菌属:G+,肠球菌属为革兰阳性,成双或短链状排列的卵圆形球菌,无芽胞,无荚膜,部分肠球菌有稀疏鞭毛,营养要求高,需氧及兼性厌氧,触酶阴性,在胆汁七叶苷和含65%Nacl培养基中可以生长,此点可与链球菌鉴别。 奈瑟菌属:G-双球菌,无鞭毛,无芽胞,有菌毛。专性需氧,氧化酶阳性。 脑膜炎奈瑟菌:流行性脑脊髓膜炎(简称流脑),空气传播,对人致病的主要是A群。氧化酶、触酶试验阳性;分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气。 淋病奈瑟菌:不酵解麦芽糖与蔗糖、30%H202试验阳性(与脑膜炎奈瑟菌鉴别)。 卡他莫拉菌:社区呼吸道感染的主要病原体之一。 肠杆菌科 肠杆菌科:均为G-杆菌。均不形成芽胞。多数有周鞭毛(运动),少数菌属细菌可形成荚膜。发酵葡萄糖产酸、产气,触酶阳性。(鉴别肠道致病菌和非致病菌常选用葡萄糖发酵试验)。 菌体(O)抗原,鞭毛(H)抗原和表面抗原(如Vi抗原、K抗原)少数菌属如志贺菌属和克雷伯菌属无鞭毛,无运动能力。 大肠埃希菌:俗称大肠杆菌,肠道正常菌群。泌尿系统感染。超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的主要产酶株。尿素酶试验阴性,吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验(IMViC)++--,克氏双糖铁琼脂(KIA)上斜面和底层均产酸产气,H2S阴性,动力、吲哚、尿素(MIU)++-。硝酸盐还原、动力多数阳性。 引起肠道感染的大肠埃希菌有下列五个病原群 (5)肠黏附性大肠埃希菌(EAggEC):腹泻; 与志贺菌相鉴别:醋酸钠和葡萄糖铵利用试验及粘质酸盐产酸三种试验。大肠埃希菌均为阳性,而志贺菌均为阴性。 志贺菌属:痢疾杆菌(细菌性痢疾)。我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢最常见。强选择鉴别培养基——沙门、志贺菌选择培养基(SS);弱选择培养基——麦康凯或中国蓝培养基。 分解葡萄糖产酸不产气,不分解乳糖(宋内志贺菌可迟缓分解乳糖),MR试验阳性,只有O抗原而无鞭毛抗原。 沙门菌属:无芽胞,无荚膜的革兰阴性直杆菌。有周身鞭毛(除鸡沙门菌外),能运动,多数有菌毛。 伤寒沙门菌:产酸不产气。动力+、脲酶+,氧化酶一,触酶+,硝酸盐还原+。肥达试验。S~R变异(光滑变粗糙,生理盐水中自凝);H~O变异(失去鞭毛);相位变异(双相变单相);V~W变异(失去Vi抗原)。 肠热症(伤寒与副伤寒病,慢性发热症状),第一、二周采血液,第二、三周采粪便与尿液。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。) 变形杆菌属:迁徙生长。具有尿素酶,可以水解尿素,产生氨 普通变形杆菌:靛基质和麦芽糖均阳性,鸟氨酸脱羧酶阴性;奇异变形杆菌相反。 外-斐反应:普通变形杆菌OX19、OX2、0Xk的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原,是用以诊断某些立克次体病的依据。 鼠疫耶尔森菌:鼠疫。两极浓染。“钟乳石”状。28~30℃。KIA结果利用葡萄糖,不利用乳糖,不产H2S,MIU均为阴性反应,丙氨酸脱氨酶试验呈阴性反应即可初步鉴定。 小肠结肠炎耶尔森菌:无芽胞,无英膜、25℃培养时形成周鞭毛,呈翻滚旋转状运动,37℃培养无动力翻滚旋转状运动。分解葡萄糖和蔗糖产酸不产气,绝大数菌株不发酵乳糖,硫化氢阴性,脲酶阳性,靛基质不定。鸟氨酸脱羧酶阳性,脲酶阳性。 假结核耶尔森菌:两端浓染。25℃培养有周鞭毛,有动力,37℃培养无动力。 肺炎克雷伯菌:医院感染,有荚膜,无鞭毛,无芽胞,G-杆菌。灰白色大而黏的菌落,长丝状。触酶阳性、脲酶阳性。动力和鸟氨酸脱羧酶阴性是本菌的最大特点。易产超广谱β-内酰胺酶。对氨苄西林天然耐药。 肠杆菌属(阴沟肠杆菌、产气肠杆菌)有周鞭毛,能运动。IMVC:肠杆菌属多为--++;而大肠埃希菌是++--。 黏质沙雷菌:革兰阴性细小杆菌。沙雷菌具DNA酶和葡萄糖酸盐阳性(与其他菌属细菌的根本区别)。 弧菌科 弧菌科:G-杆菌。共同特点是一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖。弧菌属极端鞭毛、甘露醇、脂酶、生长需要NaCl、对O129敏感五项为+++++。 霍乱弧菌(耐碱不耐酸,pH8.4~9.2时生长最好)——霍乱(米泔水样粪便);副溶血性弧菌(嗜盐性弧菌,无盐不生长,绿色菌落)——食物中毒(海产品)。 不染色标本穿梭流星状运动(鱼群状);O1群霍乱弧菌诊断血清,如果原运动活泼的现象停止(为制动试验阳性)。 副溶血性弧菌:是一种嗜盐性弧菌。常存在于近海海水、海产品及盐渍食品中。副溶血性弧菌的生化反应培养基需加入30g/L NaCl,本菌在70g/L NaCl培养基中生长,在无盐或100g/L NaCl培养基中不生长。致病因子有黏附因子(主要为菌毛)、毒素(如耐热性溶血素、TDH类毒素),所致疾病为食物中毒及急性胃肠炎,常为被污染的海产品及盐腌制品所引起,此菌尚可引起浅表创伤感染、败血症等。 气单胞菌属:在65g/L NaCl中不生长。氧化酶试验阳性可与肠杆菌科细菌鉴别,发酵葡萄糖可与非发酵菌鉴别。 弯曲菌和幽门螺杆菌 弯曲菌属:是一类微需氧,不分解糖类,氧化酶阳性,菌体弯曲呈逗点状、S形或螺旋状,有动力的革兰阴性菌。 幽门螺杆菌:是一类氧化酶和过氧化氢酶均阳性、微需氧、在37℃能够生长,在25℃和42℃均不能生长的革兰阴性弯曲的细菌。 厌氧菌 厌氧菌:一类是革兰染色阳性有芽胞的厌氧芽胞梭菌(外毒素),另一类是无芽胞的革兰阳性及革兰阴性球菌与杆菌(正常菌群,条件致病性的内源性感染)。气-液相色谱分析。 有芽胞的厌氧菌只有梭菌属;放线菌感染——硫黄样颗粒。 常规血培养阴性的细菌心内膜炎、并发脓毒症血栓性静脉炎、伴有黄疸的菌血症等,应考虑可能有厌氧菌感染。厌氧菌标本的采集多采用特殊的采集方法,如针筒抽取等。 破伤风梭菌:常见的一种芽胞杆菌,能引起破伤风。当机体受创伤时,破伤风梭菌可侵入伤口生长繁殖,产生外毒素,引起机体强直性痉挛、抽搐,称为破伤风。破伤风梭菌的致病物质主要是外毒素又称痉挛毒素。 产气英膜梭菌:临床上气性坏疽病原菌中最多见的一种梭菌,能分解肌肉和结缔组织中的糖,产生大置气体,导致组织严重气肿,继而影响血液供应,造成组织大面积坏死。 肉毒梭菌:一种寄生菌,能产生极强的外毒素。在厌氧条件下可产生极其强烈的外毒素一肉毒素。 艰难梭菌:梭菌属的一种专性厌氧菌,对氧十分敏感,很难分离培养,故得名。 需氧或兼性厌氧菌 白喉棒状杆菌:G+,异染颗粒、毒力试验,Elek平板,亚碲酸钾血琼脂。外毒素(毒血症)只有携带β-棒状噬菌体的溶原性白喉杆菌才能产生外毒素。 炭疽芽胞杆菌:人畜共患病,是致病菌中最大的革兰阳性杆菌,竹节状。倒松树状。(皮毛—皮革厂)。串珠试验。 蜡样芽胞杆菌:表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状。干热120℃经60分钟才能杀死。 产单核李斯特菌:20℃有动力,37℃动力缓慢,冷增菌(4℃)。伞状生长。通过胎盘或产道感染新生儿。本菌常伴随EB病毒引起传染性单核细胞增多症。 分支杆菌 各型结核杆菌均不发酵糖类,能产生过氧化氢酶,耐热触酶试验、聚山梨酯-80水解试验和耐热磷酸酶试验均为阴性,脲酶试验和中性红试验均为阳性。 卡介苗:毒力变异(减弱)保留抗原性。被动人工免疫。 麻风分枝杆菌:泡沫状,麻风细胞。 不发酵菌 不发酵菌:不发酵或不分解糖类的G-无芽胞需氧杆菌。 铜绿假单胞菌:无芽胞,无英膜。有1~3根鞭毛,运动活泼。氧化酶阳性,能氧化分解葡萄糖、木糖,产酸不产气。本菌能利用枸檬酸盐,不产生明除,不产生HS能液化明胶,分解尿素,还原硝酸盐并产生N2,最适温度为35℃,但在4℃不生长,此点可与荧光假单胞菌区别 不动杆菌属:生物学特征为“三阴”,即氧化酶、硝酸盐还原试验、动力阴性。临床重要的不动杆菌属细菌为醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌和洛菲不动杆菌 产碱杆菌属:在含有蛋白胨的肉汤中产氨,可使pH上升至8.6。 军团菌属:人工管道的水源中常存在此菌,如医院空调冷却水中常有此菌,对常用化学消毒剂敏感。活性炭-酵母浸出液琼脂。肺部感染。
(1)肠产毒性大肠埃希菌(ETEC):引起霍乱样肠毒素腹泻(水泻);
(2)肠致病性大肠埃希菌(EPEC):主要引起婴儿腹泻;
(3)肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC):可侵入结肠黏膜上皮,引起痢疾样腹泻(黏液脓血便);
(4)肠出血性大肠埃希菌(EHEC):又称产志贺样毒素(VT)大肠埃希氏菌(SLTEC或UTEC),其中O157:H7(常规检测项目)可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征(HUS)。临床特征为严重的腹痛、痉挛,反复出血性腹泻,伴发热、呕吐等。严重者可发展为急性肾衰竭;
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